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胚胎顯微操作-胚胎分割
日期：2025-04-24 17:39
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摘要：
(一)概況
胚胎分割是通過對胚胎進行顯微操作，人工制造同卵雙生或同卵多生的技術，它是擴大胚胎來源的一條重要途徑，其理論依據是早期胚胎的每一個卵裂球都具有獨立發育成個體的全能性。
本世紀三十年代，Pinrus等**證明兔2細胞胚的單個卵裂球在體內可發育成體積較小的胚泡。之后，Tarkowski等人的實驗胚胎學研究成果進一步證明了哺乳動物2細胞胚的每一個卵裂球都具有發育成正常胎兒的全能性。七十年代以來，隨著胚胎培養和移植技術的發展和完善，哺乳動物胚胎分割取得了突破性進展。Mullen等于1970年二分2細胞期鼠胚，通過體外培養及移植等程序，獲得了小鼠同卵雙生后代。Willadsen于1979年通過分離早期胚胎的卵裂球，成功地獲得了綿羊的同卵雙生后代。國內張涌等通過分割小鼠、山羊早期胚胎，均獲得了同卵雙生后代。進一步研究表明，四分胚，八分胚也可以發育成新個體。竇忠英等將7日齡的牛胚胎一分為四，實現了同卵三生。值得說明的是，隨著胚胎分割次數的增多，分割胚的發育能力明顯降低，這可能與胞質的不斷減少有關。
胚胎分割是通過對胚胎進行顯微操作，人工制造同卵雙生或同卵多生的技術，它是擴大胚胎來源的一條重要途徑，其理論依據是早期胚胎的每一個卵裂球都具有獨立發育成個體的全能性。
本世紀三十年代，Pinrus等**證明兔2細胞胚的單個卵裂球在體內可發育成體積較小的胚泡。之后，Tarkowski等人的實驗胚胎學研究成果進一步證明了哺乳動物2細胞胚的每一個卵裂球都具有發育成正常胎兒的全能性。七十年代以來，隨著胚胎培養和移植技術的發展和完善，哺乳動物胚胎分割取得了突破性進展。Mullen等于1970年二分2細胞期鼠胚，通過體外培養及移植等程序，獲得了小鼠同卵雙生后代。Willadsen于1979年通過分離早期胚胎的卵裂球，成功地獲得了綿羊的同卵雙生后代。國內張涌等通過分割小鼠、山羊早期胚胎，均獲得了同卵雙生后代。進一步研究表明，四分胚，八分胚也可以發育成新個體。竇忠英等將7日齡的牛胚胎一分為四，實現了同卵三生。值得說明的是，隨著胚胎分割次數的增多，分割胚的發育能力明顯降低，這可能與胞質的不斷減少有關。
(二)分割方法
胚胎分割方法主要有顯微操作儀分割和徒手分割兩種。
1.顯微操作儀分割
在操作儀操縱下，左側用固定吸管固定胚胎，右側將切割刀(針)的切割部位放在胚胎的正上方，并垂直施加壓力，當觸到平皿底時，稍加來回抽動，即可將胚胎的內細胞團從中央等分切開，也可只在透明帶上作一個切口，切割并吸出半個胚胎。此法成功率高，但需要昂貴的儀器設備。
2．徒手分割
先用0.1～0.2％鏈霉蛋白酶軟化透明帶，在實體顯微境下，用自制切割針直接等分切割胚胎，為防止切割時胚胎滾動，可將胚胎置于微滴中進行切割，分開后及時加入液體。本法簡單易行，但需要有靈巧而熟練的操作技能。
無論那種方法，分割好的半胚應完全分離，可分別裝入空透明帶內，也可不裝入透明帶直接移植。分割桑椹胚無方向性，而囊胚則必須沿著等分內細胞團的方向分割胚胎。
目前，胚胎分割與胚胎冷凍這兩項技術已緊密結合在一起、分割成的半胚在冷凍解凍后經移植，仍可發育成新個體，并可用來生產異齡同卵雙生后代，在育種方面發揮作用。毫無疑問，胚胎分割和胚胎冷凍技術可為實施胚胎移植提供大量的胚胎，從而促進了胚胎移植技術的推廣應用。
